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western blot (WB)實(shí)驗(yàn)代測(cè),為您提供以下服務(wù)!
更新時(shí)間:2019-07-24   點(diǎn)擊次數(shù):1736次

western blot (WB)實(shí)驗(yàn)代測(cè),為您提供以下服務(wù)!


免疫印跡(immunblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(western blot),他是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。western blot是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性,現(xiàn)在已成為蛋白分選的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡(western blot)常用于鑒定某種蛋白,并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分選。
 

Western blot的原理 
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測(cè)物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。 

 

以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。


Western blot樣本要求

客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品, 檢測(cè)目的蛋白的一抗(或由本公司代購(gòu))。樣品要求為:
 
1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。
2、細(xì)胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。
3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。

 
Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供
內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張,可提供掃描圖,實(shí)驗(yàn)報(bào)告,包括整個(gè)試驗(yàn)流程所涉及的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)步驟。如需進(jìn)行蛋白純化服務(wù),將提供檢測(cè)報(bào)告


服務(wù)內(nèi)容
我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測(cè)的全流程服務(wù),如需要還可進(jìn)行灰度分析。
說明
1、建議提供目的蛋白陽(yáng)性表達(dá)樣品(純蛋白或有陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞或組織)作為陽(yáng)性對(duì)照。
2、每張膜檢測(cè)1-8個(gè)樣品。
3、如果一抗由客戶提供,請(qǐng)?jiān)谡_條件下保存,避免污染及反復(fù)凍融。
 
western blot (WB)服務(wù)須知: 
1. 樣本要求盡可能新鮮;
2. 樣本量:組織樣本,質(zhì)量大于100mg;細(xì)胞樣本,細(xì)胞數(shù)大于1×106;
3. 您可自備一抗,也可讓我公司代買。為保證質(zhì)量,抗體為進(jìn)口單克隆抗體;
4. 服務(wù)時(shí)限和內(nèi)容:收到樣本之日起2-3周內(nèi)提交實(shí)驗(yàn)結(jié)果,具體包括實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器、圖片及相關(guān)分析數(shù)據(jù)等;
5. 報(bào)告提供:實(shí)驗(yàn)結(jié)果將以電子或書面形式提交給您。

 

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