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小鼠胱抑素C elisa試劑盒原來是這樣操作的!
更新時間:2018-06-08   點擊次數:1369次

小鼠胱抑素C elisa試劑盒原來是這樣操作的!

小鼠胱抑素C(Cystatin C)elisa試劑盒基本信息

1983年Anastasi等在雞蛋清中分離純化得到高純度的半胱胺酸蛋白酶抑制劑(cysteine proteinase inhibitor,CPI)后被命名為胱抑素C.是一種半胱胺酸蛋白酶抑制劑,也被稱為γ-微量蛋白及γ-后球蛋白,廣泛存在于各種組織的有核細胞和體液中,是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質,分子量為13.3KD,由122個氨基酸殘基組成,可由機體所有有核細胞產生,產生率恒定。循環中的胱抑素 c僅經腎小球濾過而被清除,是一種反映腎小球濾過率變化的內源性標志物,并在近曲小管重吸收,但重吸收后被*代謝分解,不返回血液,因此,其血中濃度由腎小球濾過決定,而不依賴任何外來因素,如性別、年齡、飲食的影響,是一種反映腎小球濾過率變化的理想同源性標志物。

小鼠胱抑素C(Cystatin C)elisa試劑盒操作方法

實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。

5. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

購買我司elisa試劑盒可以提供免費代測服務,客戶準備好樣本,上海和南京地區的客戶可以提供免費上門取樣服務。其他地區的客戶,樣本用泡沫箱子包好,放干冰或者冰袋寄送給我們。代測時間為5到7個工作日提供原始數據,分析數據, 實驗操作步驟以及實驗所用儀器。

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