一、概述 可溶性抗原（如細(xì)菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他來源的蛋白質(zhì)、多糖質(zhì)、類脂體等）與其相應(yīng)的抗體相遇后，在電解質(zhì)參與下，抗原抗體結(jié)合形成白色絮狀沉淀，出現(xiàn)白色沉淀線，此種現(xiàn)象稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,與沉淀原發(fā)生反應(yīng)的抗體稱為沉淀素（precipitin）。沉淀反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制與凝集反應(yīng)基本相同。不同之點(diǎn)是：沉淀原分子小，單位體積內(nèi)總面積大，故在定量試驗(yàn)時，通常稀釋抗原。沉淀反應(yīng)主要包括有環(huán)狀沉淀反應(yīng)、絮狀沉淀反應(yīng)和瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)。環(huán)狀沉淀反應(yīng)是zui早的沉淀反應(yīng)，目前在鏈球菌的分類、鑒定，昆蟲吸血性能及所吸血液來自何種動物的鑒別，肉品種屬鑒定及炭疽尸體與皮張的檢驗(yàn)工作中仍然應(yīng)用。主要是用已知的抗體診斷未知的抗原。絮狀沉淀反應(yīng)是將抗原與血清在試管內(nèi)混合，在電解質(zhì)存在的情況下，抗原抗體復(fù)合物可形成混濁沉淀或絮狀沉淀凝聚物，此法通常用于毒素與抗毒素的滴定。瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散（Agar－gel immunodiffusion）是沉淀反應(yīng)的一種形式，是指抗原抗體在瓊脂凝膠內(nèi)擴(kuò)散，特異性的抗原抗體相遇后，在凝膠內(nèi)的電解質(zhì)參與下發(fā)生沉淀，形成可見的沉淀線。這種反應(yīng)簡稱瓊脂擴(kuò)散。抗原抗體擴(kuò)散使用的凝膠種類很多，除瓊脂外還有明膠、果膠、聚丙烯酰胺等，因此總的名稱叫免疫擴(kuò)散（Immunodiffusion 簡寫為ID）。瓊脂擴(kuò)散是免疫擴(kuò)散中的一種方法。瓊脂擴(kuò)散的原理是：物質(zhì)自由運(yùn)動形成擴(kuò)散現(xiàn)象，擴(kuò)散可以在各種介質(zhì)中進(jìn)行。我們所使用的1％～2%的瓊脂凝膠，瓊脂形成網(wǎng)狀構(gòu)架，空隙中是98％~99%的水，擴(kuò)散就在此水中進(jìn)行。1％~2%瓊脂所形成的構(gòu)架網(wǎng)孔較大，允許分子量在20萬以下甚至更大些的大分子物質(zhì)通過，絕大多數(shù)可溶性抗原和抗體的分子量在20萬以下，因此可以在瓊脂凝膠中自由擴(kuò)散，所受阻力甚小。二者在瓊脂凝膠中相遇，在zui適比例處發(fā)生沉淀，此沉淀物因顆粒較大而不擴(kuò)散，故形成沉淀帶。一種抗原抗體系統(tǒng)只出現(xiàn)一條沉淀帶，復(fù)合物抗原中的多種抗原抗體系統(tǒng)均可根據(jù)自己的濃度、擴(kuò)散系數(shù)、zui適比等因素形成自己的沉淀帶。本法的主要優(yōu)點(diǎn)是能將復(fù)合的抗原成分加以區(qū)分，根據(jù)沉淀帶出現(xiàn)的數(shù)目、位置以及相鄰二條沉淀帶之間的融合、交叉、分枝等情況，就可了解該復(fù)合抗原的組成。 二、環(huán)狀沉淀反應(yīng) 以炭疽環(huán)狀沉淀反應(yīng)為例，此反應(yīng)又稱ASColi氏反應(yīng)。（一）材料與試劑1．已知炭疽沉淀血清，購買自生物制品所。2．待測炭疽沉淀抗原3．試管5mm×50mm、滴管4．0.3%石炭酸生理鹽水（二）操作方法1．待測抗原的提取（1）取可疑為炭疽而死的病畜的實(shí)質(zhì)臟器1g，放入試管或小三角燒瓶中，加生理鹽水5ml～10ml，煮沸30min～40min，冷卻后用濾紙過濾得清澈的液體，即為待測抗原。（2）如病料是皮張，可采用冷浸法。將樣品高壓滅活后，剪成小塊并稱重，加約5倍的0.5%生理鹽水，室溫浸泡18h～24小時，濾紙過濾，即為待檢抗原。2．取試管5支（5mm×50mm）置于試管架上，編號。第1、2試管內(nèi)加炭疽沉淀血清，第3、4試管內(nèi)加正常血清，第5管內(nèi)加待檢抗原，分別用毛細(xì)滴管加至4mm～5mm。3．第1、4、5試管輕輕疊加等量緩沖液，第2、3試管輕輕疊加等量待檢抗原。為防止上下兩界面破壞，可將小試管從試管架取出，微傾斜，沿試管壁加入緩沖液或抗原。4．在試管架上靜置數(shù)分鐘，觀察結(jié)果。（三）結(jié)果判定 第2管內(nèi)兩液界面出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀帶，其余管無此種沉淀帶判為陽性。（四）注意事項(xiàng)1．反應(yīng)物必須清澈，如不清澈，可離心，取上清液或冷藏后使脂類物質(zhì)上浮，用吸管吸取底層的液體。2．必須進(jìn)行對照觀察，以免出現(xiàn)假陽性。3．采用環(huán)狀沉淀反應(yīng)，用以沉淀素效價滴定時，可將抗原做100×，1 000×，2 000×，4 000×，8 000×等稀釋，分別疊加于抗血清上，以出現(xiàn)環(huán)狀沉淀的zui大稀釋倍數(shù)，即為該血清的沉淀素效價。三、瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn) （一）材料與試劑1．瓊脂粉2．平皿3．打孔器4．生理鹽水或其他緩沖液，可加1/萬的硫柳汞或疊氮鈉防腐。
elisa試劑盒，進(jìn)口elisa試劑盒，放射免疫試劑盒，amresco，Gibco培養(yǎng)基-南京信帆生物技術(shù)有限公司
在線咨詢